ВВЕДЕНИЕ

 

В настоящее время интенсивные технологии в животноводстве зани­мают веду­щее значение. Процесс эффективного молочного и мясного произ­водства все стреми­тельней отдаляет условия содержания животных  от их ес­тественной среды обитания. Сегодня уже смело можно сказать, что чем выше продуктивность животных, тем больше сбоев и срывов происходит из-за нарушения обмена веществ, в связи с особым значением кормления и содержа­ния. Поэтому все без исключения специалисты жи­вотноводства должны уча­ствовать в процессе не только производства продукции, но и создания ком­фортных условий пребывания животных на ферме.

Высокая продуктивность животных неразрывно связана с активизацией функ­ционирования всех органов и систем организма. При этом уровень об­мена веществ у некоторых животных настолько высок, что организм может работать на самоуничто­жение. К сожалению, многие руководители хозяйств, специалисты-зооинженеры, ве­теринарные врачи и даже ряд ученых этим пренебрегают. В наиболее распространен­ном понимании это выглядит так: «Животное имеет достаточно высокую продуктив­ность при имеющемся кормлении, качестве обслуживания и обработках– значит все нормально. Нужно еще поискать резервы экономии ресурсов». В результате таких на­строений многие не могут понять, почему при погоне за удоем стремительно сокраща­ется поголовье, почему коровы заканчивают третью лактацию на мя­сокомбинате с жи­ровой дистрофией печени и т.д.

В большинстве случаев мы замечаем от­клонения в здоровье, когда уже есть сим­птомы заболевания, а, значит, негативный фактор был, он оставил свой след в орга­низме и, теперь, выдает ответную реакцию орга­низма на его воздействие. Другими словами мы пропускаем, минимум два периода развития процесса – проникновение и распространение в организме. Разрабатывая наши рекомендации, надеемся, что вы, ре­гулярно пользуясь биохимическими исследованиями крови, сможете на ранних ста­диях неблагоприятного влияния своевременно отреагировать, классифицировать и принять меры к устранению воздействия.

Кровь является одной из главнейших связующих систем целостного организма. Она обеспечивает питание и дыхание всех органов и тканей, снабжает их необходи­мыми ферментами, гормонами, медиаторами и дру­гими гуморальными веществами, без которых нормальное функционирова­ние организма невозможно. У здоровых жи­вотных при нормальных физиоло­гических условиях существует постоянство химико-морфологического со­става и физико-химических свойств крови. Кроветворные органы чувстви­тельно реагируют на различные физиологические и, в особенности на пато­логические, воздействия на организм изменением картины крови. Поэтому исследова­ние крови имеет большое диагностическое значение.

Конечно, нужно заметить, что определенную ценность биохимические показа­тели имеют при внутренних незаразных болезнях, интоксикациях, но в большей сте­пени отражают уровень кормления и обменные процессы. В связи с этим биохимиче­ские показатели не могут дать ответы на все вопросы, но при правильном понимании физиологических изменений становятся твердым основанием для принятия производ­ственных решений.

 

 

 

ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ КРОВИ

 

Для того чтобы провести биохимическое исследование необходимо правильно про­извести отбор крови у животных.

Существует несколько вариантов взятия крови. Многие специалисты успешно их используют. Мы же остановимся на классическом (традиционном) способе.

У крупных животных кровь берут из яремной вены, расположенной в яремном же­лобе. Предварительно проводят антисептическую обработку – в месте вкола шерсть вы­стригают, поверхность кожи обрабатывают 70%-ным раствором спирта или 5% раствором йода.

Для взятия используют специальные инъекционные иглы заранее стерилизован­ные. Вкол проводят под углом 45⁰ и во время набора крови иглу при­жимают к стенке про­бирки, чтобы избежать вспенивания.

Метод взятия крови у овец и коз такой же как и у коров.

У свиней кровь получают, отсекая кончик хвоста. У поросят оптимальным ме­стом для взятия служит полая вена.

У птицы кровь берут из разреза гребня или сережек. У гусей и уток пункцию бе­рут из мякоти ступней лапок.

Пробирки для отбора проб крови на исследования специалисты хо­зяйств могут по­лучать в ветеринарной лаборатории или заранее готовить в условиях хозяйства, если та­кая возможность имеется.

Во время подготовки специальной посуды на одно животное запасают по 2 био­ло­гических пробирки, объемом не менее 20 мл, и по 2 центрифуж­ных пробирки объе­мом 12 мл. В первую биологическую пробирку (20 мл) вносят 1%-ный раствор гепарина 2-3 капли или, если не определяется натрий в плазме крови, то для стабилизации исполь­зуют лимоннокислый натрий. В результате полученную плазму можно исследовать на калий, натрий, каротин, витамины А и С.

Вторую пробирку оставляют без изменений, так как в ней будут полу­чать сыво­ротку крови. В сыворотке крови определяют содержание общего белка, белковых фрак­ций, мочевины, общих липидов, общего холестерина, общего кальция, йода неор­ганиче­ского, активность щелочной фосфатазы и др.

В одну из центрифужных пробирок вносят 0,5 мл вазелинового масла и каплю 1%-ного гепарина. После длительного центрифугирования 20-30 мин. уже в плазме оп­реде­ляют резервную щелочность. Во вторую центрифужную пробирку вносят 5 мл 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. В даль­нейшем из этой пробирки опреде­ляют глю­козу, неорганический фосфор и неорганический магний.

Для всех пробирок используются резиновые пробки, но в некоторых случаях до­пускаются пробки из ватных тампонов завернутых в марлевую по­вязку, при обязатель­ном условии стерилизации и вертикальной транспорти­ровки проб.

Таким образом, уже сама подготовка пробирок для взятия крови жи­вотных на ис­следование является трудоемкой и длительной. Поэтому в по­следнее время ее значи­тельно упростили. Например, для биохимического ис­следования отбирают по 2⁄3 20 мл пробирки, а для гематологического и того меньше. В первую очередь это связано с раз­работкой в научно-исследова­тельских институтах специальных диагностикумов для оп­ределения биохи­мических компонентов с более мягкими требованиями пробоподго­товки. Но и не последнее место занимает, конечно, сама точность и направление иссле­дований. Если в каких то реакциях вам не нужны сотые и тысячные доли (не научные исследова­ния) или вы уделяете большее внимание, каким то кон­кретным показателям, то, естест­венно, лучше упростить процедуру отбора.

БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ

 

Каротин

 

Каротин является провитамином ретинола – витамина А. Содер­жится в расти­тельных кормах, молозиве, рыбьем жире. Наибольшее значение имеет β-каротин. В тонком ки­шечнике и печени β-каротин превращается в витамин А. Основное депо ка­ротина и ви­тамина А – печень.

Витамин А способствует биосинтезу холестерина, ускоряет обмен фосфорных соединений, участвует в обмене веществ, повышает реактивность и резистентность, участвует в процессах иммуногенеза, повышении фагоци­тарной активности лейкоци­тов и выработке антител, стимулирует рост и раз­витие животных.

Количество каротина в сыворотке крови определяют спектрофото­метрическим методом.

Принцип метода основан на щелочном гидролизе и экстракции витамина А и каротина из плазмы крови при помощи малолетучих растворителей и последующем спектрофотометрическом измерении поглощения света раствором при длине волны 328 нм для витамина А и 460 нм для каротина.

Материал для исследования – плазма крови.

Физиологические пределы: Содержание каротина в сыворотке крови повыша­ется в летний период и снижается в зимне-стойловый период. Уровень каротина в сы­воротке крови свидетельствует о величине поступления его в организм с кормами. Ус­воение его и превращение в витамин А зависит от интенсивности обменных процессов в организме.

 

Количество каротина в сыворотке крови животных

 

 

Примечание: уровень витамина А и каротина снижается при хранении плазмы, что следует учитывать при проведении анализов.

 

Уменьшение количества каротина в сыворотке – гипокаротинемия, а витамина А – гиповитаминоз А.

 

Кальций

 

Входит в состав костей, участвует в свертывании крови, поддерживает возбуди­мость нервов и мышечной ткани, повышает тонус миокарда, активирует ферменты. Кальций всасывается в передней части тон­кого кишечника, а выделяется в основном толстым кишечником, а также почками и печенью. У лактирующих животных кальций выделяется в основ­ном с молоком.

В сыворотке крови общий кальций находится в виде ультрафильтри­рующейся и коллоидной фракций. Среди соединений кальция различают белковосвязанный (каль­цийпротеинаты, комплексоны), ионообменный и ки­слоторастворимый кальций. Регу­ляция обмена кальция в организме осущест­вляется паращитовидными, щитовидными железами и витамином D.

Количество общего кальция в сыворотке крови определяют комплек­сометриче­ским методом.

Принцип метода: Мураксид при рН 10-13 образует с кальцием соединение ро­зового цвета. При добавлении трилона Б, последний образует с кальцием более проч­ное комплексное соединение и мураксид освобождается с восстановлением в точке эк­вивалентности первоначального фиолетового цвета.

Материал для исследований – сыворотка крови.

Физиологические пределы: Концентрация кальция в крови животных величина довольно постоянная. Однако содержание его в сыворотке крови все же изменяется в зависимости от уровня поступления его с кормами и клинического состояния живот­ного.

 

Количество общего кальция в сыворотке крови здоровых живот­ных

 

 

Примечание:  определение кальция в сыворотке крови или  плазме (показатели одинаковы) необходимо для характеристики кальций-фосфорного соотношения.

 

Снижение общего кальция в сыворотке – гипокальциемия, а повыше­ние – гипер­кальциемия (встречается редко).

 

Неорганический фосфор

 

Содержится в основном в костной ткани, а также в мышечной и нервной тканях, крови. Входит в состав фосфатного бу­фера крови, АТФ, АДФ; участвует в регуляции кислотно-щелочного равно­весия, а также в углеводном, жировом и белковых обменах.

Всасывание фосфора происходит в тонком кишечнике, чему способст­вует его щелочная среда. При избытке кальция и магния в кишечном содер­жимом и недостатке витамина D всасывание фосфора ухудшается.

Выделение фосфора из организма происходит в основном с мочой, в период лак­тации фосфор в основном выделяется с молоком.

Определение количества неорганического фосфора в сыворотке крови проводят с ванадат-молибдатным реактивом.

Принцип метода: фосфор в безбелковом фильтрате крови с ванадат-молибдат­ным реактивом образует лимонно-желтое окрашивание, интенсивность которого про­порциональна его количеству в пробе.

Материал для исследования – безбелковый фильтрат крови, полученный путем смешивания равных объемов гепаринизированной крови и 20%-ного раствора трихло­руксусной кислоты и последующего центрифугирования.

Физиологические пределы представлены в таблице.

 

Количество неорганического фосфора в сыворотке крови

здоровых животных

 

 

Примечание: При длительном состоянии сыво­ротки крови происходит диализ органического фосфата, увеличивается кон­центрация неорганического фосфора, по­этому необходимо проводить анализ свежей сыворотки.

 

Снижение содержания фосфора в сыворотке крови – гипофосфатемия, а повы­шение – гиперфосфатемия.

 

Кальций фосфорное отношение

 

Уровень кальция и фосфора плазмы крови регулируется за счет производных ви­тамина D, кальцитонина и паратгормона. Усвоению организмом кальция больше всего способствует фосфор, который сам активно всасывается в организме при наличии дос­таточного количества витамина D.

При недостатке производных витамина D в организме накапливается пируват, поэтому определение уровня пировиноградной кислоты является косвенным показате­лем обеспеченности животного витамином D.

Большое количество кальция расходуется вместе с фосфором на образование костей и зубов в форме нерастворимого фосфата кальция и магния. Таким образом, кальций и фосфор могут откладываться в пористой части костей, и при недостатке в кормах или повышенной потребности эти запасы используются. Во время лактации большое количество кальция выделяется с молоком и необходимость в нем у самок выше.

Физиологические нормы: кальций фосфорное отношение (Са/Р)

для крупного рогатого скота составляет 2 : 1,

для свиней – 1,5 : 1,

для птиц – 3 : 1.

для собак - 1-2:1

 

 

Сахар (глюкоза)

 

Определяют его содержание для оценки состояния углевод­ного обмена – под са­харом крови обычно подразумевают только глюкозу, как основной источник энергии в организме (структурные сахара не учитываются).

Всасывается в тонком кишечнике и немного в толстом, в основном синтезиру­ется  и откладывается в печени в виде гликогена. Наиболее выра­женной гликогенно­стью обладает пропионовая кислота.

Регуляцию уровня глюкозы крови осуществляют поджелудочная и щи­товидная железы, гипоталамус, гипофиз, надпочечники, симпатический от­дел вегетативной нервной системы.

Количество сахара в безбелковом фильтрате крови определяют реакцией с орто-толуидином (а) или с реактивом Самоджи (б).

Принцип методов:

а) глюкоза при нагревании с орто-толуидином в растворе уксусной кислоты образует соединение, интенсивность окраски которого пропорциональна концентра­ции глюкозы.

б) метод основан на окислении глюкозы в щелочной среде при кипячении с сернокислой медью. При йодометрическом определении образовавшаяся закись меди окисляется йодом. Последний освобождается подкислением определенного количества йододновалентного калия и йодистого калия, а оставшийся свободный йод оттитровы­вается гипосульфитом.

Материал для исследований:

а) безбелковый фильтрат крови полученный путем смешивания и после­дующего центрифугирования равных объемов 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и цельной крови.

б) стабилизированная фтористым натрием кровь.

Физиологические пределы представлены в таблице.

 

Количество глюкозы в крови животных

 

 

Примечание: Глюкоза – нестойкое органическое соединение организма: спустя сутки после получения пробы крови (плазмы) концентрация в ней глюкозы падает на 30-40%, что необходимо учитывать в диагностической работе.

 

Снижение глюкозы в крови – гипогликемия, а повышение – гипергли­кемия.

 

Общий белок

 

В сыворотке крови из сухого остатка больше всего содержится белка, который состоит из альбуминов и глобулинов. Сыворо­точные белки влияют на поддержание вязкости крови, осмотического давле­ния, транспорте многих веществ, регуляции по­стоянства рН крови, сверты­вании крови, иммунных процессов.

Часть белков в организм поступает с кормом. Впоследствии они распадаются до аминокислот, которые служат строительным материалом для белков внутренней среды организма. Основные фракции белков синтезируются в гепатоцитах печени (альбу­мины, a-глобулины, частично b-глобулины) и ретикулоэндотелиальной системе (γ-глобу­лины).

Альбумины можно рассматривать, как аминокислотный резерв организма на случай острой недостаточности (содержат до 600 аминокислотных остатков). Альбу­мины выступают в роли отдельной буферной систем, принимают активное участие в транспортировке различных веществ – гормонов, витаминов, билирубина, жирных ки­слот, минеральных соединений и лекарственных препаратов.

a-глобулины характеризуются как белки-носители, специализирующиеся на пе­реносе металлов. Некоторые из белков этой фракции участвуют в свертывании крови, некоторые являются антителами.

Большое значение среди b-глобулинов имеет трансферрин – основной резерв железа крови и проконвертин, который способствует переходу протромбина в тромбин в процессе свертывания крови. Активно взаимодействуют с липидами крови.

γ-глобу­линам определена роль защитных факторов организма (иммуноглобу­лины), так как большинство иммунных белков содержится именно в этой фракции.

Белковые фракции в сыворотке крови определяется нефелометрическим мето­дом.

Принцип метода основан на способности белков осаждаться фосфатными рас­творами различной концентрации. Устанавливают в штативе 6 пробирок на каждую пробу, обозначив их цифрами 0,1,2,3,4,5. Пробирку № 0 используют как контроль для определения оптической плотности.

Материал для исследований – сыворотка крови.

Расчет результатов производится по схеме:

ОП* пробирки №1 – ОП пробирки №2 = ОП альбуминов

ОП пробирки №2 – ОП пробирки №3 = ОП a-глобулинов

ОП пробирки №3 – ОП пробирки №4 = ОП b-глобулинов

ОП пробирки №4 – ОП g-глобулинов

·        ОП – оптическая плотность

Принимая сумму ОП альбуминов и всех глобулиновых фракций за 100%, вычис­ляют содержание каждой фракции в относительных процентах. Зная концентрацию общего белка можно произвести перерасчет в абсолютные величины.

Пример расчета:

ОП пробирки №1 = 0,800; ОП пробирки №2 = 0,400;

ОП пробирки №3 = 0,300; ОП пробирки №4 = 0,200;

тогда ОП альбуминов = 0,800 – 0,400 = 0,400;

ОП a-глобулинов = 0,400 – 0,300 = 0,100;

ОП b-глобулинов = 0,300 – 0,200 = 0,100;

ОП g-глобулинов = 0,200;

 

Физиологические пределы: Определение белковых фракций позволяет провести дифференциацию отдельных видов гипо- и гиперпротеинемий, а также выявить про­филь белковых фракций сыворотки крови при ряде заболеваний и состояний, не со­провождающихся изменениями общего содержания белка.

 

Количество общего белка и белковых фракций в сыворотке крови

 

 

Уменьшение количества общего белка – гипопротеинемия, а повышение – ги­перпротеинемия.

 

Белковый индекс

 

Это соотношение альбуминов к глобулинам (А/SГ), он показывает интенсив­ность белкового обмена. При многих заболеваниях изменяется процентное соотноше­ние белковых фракций, хотя общее содержание белка в сыворотке крови остается в пределах нормы.

Принцип определения: кол-во альбуминов/кол-во глобулинов.

Физиологические пределы:

крупный рогатый скот        0,9 :1,4,

свиньи                                 0,8:1,0

собаки                                 0,5-1,3 

 

Калий и натрий

 

Являются основными клеточными катионами, участвуют в регулировании осмо­тического давления крови и поддержании кислотно-щелочного равновесия. Прини­мают участие в сокращении мышц, функциональной деятельности сердца, фермент­ных процессах, влияют на процессы нервной деятельности и обмене веществ. Всасы­ваются очень легко во всех отделах пищеварительной системы. Из организма выделя­ются в основном с мочой и потом, частично с калом.

Определение калия и натрия в плазме крови проводят методом пламенной фото­метрии.

Принцип метода: при сгорании металлов возникает излучение, интенсивность которого зависит от концентрации элементов, содержащихся в растворе. На пути из­лучения ставятся светофильтры, пропускающие волну определенной длины. Свет, прошедший через светофильтр, попадает на селеновый фотоэлемент, где преобразу­ется в электрический ток, измеряемый гальванометром. Между концентрацией веще­ства, содержащегося в исследуемом растворе, и отклонением шкалы гальванометра имеется определенная связь, которая устанавливается путем анализа стандартных рас­творов с содержанием известного количества калия или натрия при определенном дав­лении газа или воздуха.

Материал для исследования – плазма, полученная в течении 4-х часов после от­бора проб крови.

Физиологические пределы приведены в таблице.

 

Количество калия и натрия в плазме крови животных

 

 

Примечание: большое поступление калия с кормом может выводить натрий из организма, так как они имеют различное биохимическое значение (антагонисты).

 

Уменьшение количества калия или натрия называется гипокалиемия и гипонат­риемия соответственно, а повышение – гиперкалиемия и гипернатриемия.

 

Аминный азот

 

В понятие остаточного азота входит группа азотсодержащих веществ, которые определяются в сыворотке крови, после осаждения белков. Они являются конечными продуктами обмена белков в животном организме. Состав остаточного азота: азот мо­чевины – 50-70%, аминокислот – 25-30%, мочевой кислоты, азот креатина и креати­нина, аммиака, индикана, остальные небелковые вещества. В целях диагностики ис­пользуют определение как суммарного количества остаточного азота, так и веществ его составляющих.

Аминный азот – азот свободных аминокислот, таких как глицин, аланин, аспара­гиновая кислота, лейцин, глютамин и глютаминовая кислота. Эти аминокислоты ис­пользуются организмом при белково-углеводном обмене.

Определяют остаточный азот колориметрическим методом с реактивом Несс­лера.

Принцип метода: Азот всех исследуемых фракций превращают в сульфат ам­мония и переводят в окрашенное соединение с помощью реактива Несслера. Интен­сивность окраски пропорциональна содержанию азота.

Материалом для исследования служит сыворотка крови.

Физиологический предел аминного азота для крупного рогатого скота – 4-6 мг%, у свиней 6,0-8,5 мг%.

 

 

Мочевина

 

Главный компонент остаточного азота, конечный продукт азотистого метабо­лизма, синтезирующийся в печени после дезаминирования (окисления) избыточных аминокислот.

Мочевина, количество которой определяется разностью между количеством азота поступившего с пищей и количеством азота в других экскретируемых соедине­ниях. При положительном азотистом балансе экскреция мочевины уменьшается; если происходит увеличение экскреции азота вследствие распада белков организма, повы­шение азота мочи происходит за счет мочевины. Таким образом, образование и экс­креция мочевины являются регулирующим механизмом, с помощью которого поддер­живается азотистое равновесие.

Мочевину определяют реакцией с диацетилмонооксимом.

Принцип метода: Мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и ионов железа окрашенное соединение, интенсивность окраски ко­торого пропорциональна концентрации мочевины в сыворотке крови.

Материал для исследований – сыворотка крови.

Физиологические пределы приведены в таблице:

 

Количество мочевины у здоровых животных

 

 

Примечание: величина остаточного азота параллельна величине мочевины и для клинических целей, как правило, исследуют либо остаточный азот, либо мочевину.

 

Резервная щелочность

 

Кровь животного характеризуется относительным постоянством концентрации водородных ионов, о которой принято судить по величине рН. Необходимость такого постоянства очевидна, учитывая невозможность жизненных процессов без фермент­ных систем, активность которых находится в тесной связи с рН среды.

В организм жи­вотного с кормами поступают соединения кислого (животные корма) и щелочного (растительные корма) характера. Однако эта ситуация не изменяет величины рН крови благодаря наличию в ней регуляторных систем. Регуляторными системами организма являются буферные системы крови и тканей, функции легких и почек. Буферная ем­кость (сила буферной системы) крови очень велика. Для смещения рН крови к ней не­обходимо добавить в 320 раз больше кислоты, чем к такому же ко­личеству воды.

Резервную щелочность определяют диффузионным методом.

Принцип метода: В одной половине сдвоенной колбы плазма крови обрабаты­вается серной кислотой, благодаря чему выделяется углекислый газ (СО₂), находя­щийся в составе бикарбонатов. Выделившийся углекислый газ поглощается раствором едкого натра, который находится в другой половине колбы. Избыток едкого натра, не вошедшего в реакцию с углекислым газом, и половину натрия углекислого (Na₂CO₃), образовавшегося в процессе поглощения СО₂, оттитровывают раствором серной ки­слоты. По количеству связанного едкого натра определяют количество выделенного из плазмы углекислого газа (СО₂), которое эквивалентно содержанию бикарбонатов (Na­HCO₃).

Материалом для исследований служит плазма крови, полученная в условиях, максимально исключающих доступ воздуха в пробу.

Физиологические пределы представлены в таблице.

 

Количество резервной щелочности и кислотной емкости крови

у здоровых животных

 

 

Отклонение этих показателей от физиологической нормы к снижению преду­преждает об ацидозе (недостаток щелочных эквивалентов), к повышению – алкалозе (недостаток кислотных эквивалентов).

 

НЭЖК

 

Неэстерфицированные жирные кислоты – летучие (свободные) жирные кислоты ферментируются микрофлорой рубца, являются промежуточным продуктом обмена липидов и внутренним источником энергии многокамерных животных. К ним отно­сятся: уксусная – 65%, пропионовая – 20% и масляная – 10% кислоты. После всасыва­ния из рубца пропионовая кислота поступает в печень, где участвует в синтезе глю­козы. В свою очередь глюкоза используется молочными железами как источник энер­гии и при синтезе лактозы. Ряд исследователей считают, что глюкоза, образованная из пропионовой кислоты определяет ежедневный удой.

НЭЖК определяют колориметрическим методом по реакции с диэтилдитиокар­боматом натрия.

Принцип метода: Оптическая плотность раствора сыворотки крови и диэтилди­тиокарбомата натрия в присутствии хлороформа и йодного реактива прямо пропор­ционально содержанию свободных жирных кислот.

Материал для исследований – сыворотка крови.

Физиологический предел:

для крупного рогатого скота равен 0,3-0,4 мэкв/мл.

 

Кетоновые тела

 

Это промежуточные продукты обмена липидов (жиров), такие как ацетоуксусная кислота, b-оксимасляная кислота, ацетон, которые синтезируются в эпителии предже­лудков и печени, характеризуют обмен веществ, особенно жиров, в организме.

Кетоновые тела определяют йодометрическим методом.

Принцип метода: Под действием серной кислоты кетоновые тела распадаются до ацетона. Последний соединяется с йодом, образуя комплексное соединение. При помощи гипосульфата свободный йод оттитровывают и по разности между контролем и опытом определяют связанный йод.

Материал для исследований – безбелковый фильтрат крови.

Физиологические пределы представлены в таблице.

 

Количество кетоновых тел в крови у здоровых животных

 

 

Примечание: при клинической форме кетоза содержание кетоновых тел в крови значительно возрастает и увеличивается их выделение с мочой и молоком (выше 10 мг%), что улавливается качественной пробой Лестраде.

 

Увеличение количества кетоновых тел в крови называется – кетонемия.

 

Пировиноградная кислота

 

Один из основных метаболитов глюкозы, является связующим звеном в обмене белков и углеводов, промежуточный продукт превращения аминокислот. Обмен ве­ществ в организме протекает взаимосвязано. Интенсивность белкового и жирового обмена обуславливается интенсивностью углеводного и наоборот. Например, для об­разования пировиноградной кислоты необходимы углеводы. При недостатке углево­дов, их нехватка в организме компенсируется в результате глюкогенеза, или пирови­ноградная кислота может образовываться вследствие дезаминирования некоторых аминокислот. Поэтому показатель содержания пировиноградной кислоты может быть использован в качестве характеристики углеводного обмена.

Пировиноградную кислоту определяют фотоколориметрическим методом.

Принцип метода: в присутствии раствора трихлоруксусной кислоты ДНФГ, то­луола и углекислого натрия пировиноградная кислота дает соединение с едким на­тром, интенсивность окрашивания которого пропорциональна ее концентрации.

Материал для исследования – стабилизированная кровь.

Физиологические пределы представлены в таблице.

 

Количество пировиноградной кислоты в крови животных

 

 

Ферменты

 

Промежуточный обмен веществ – это общность химических превращений, кото­рым подвергаются питательные вещества после их всасывания из пищеварительного канала и до выделения продуктов обмена из организма. Эти превращения осуществ­ляются главным образом внутри клеток, с участием ферментов. Совокупность биохи­мических реакций, катализируемых ферментами, составляет сущность обмена ве­ществ. В результате организм получает необходимые вещества и энергию для процес­сов жизнедеятельности, роста и образования продукции (молока, мяса, яиц). Ферменты наиболее активны в пределах узкой зоны, соответствующей для животных тканей фи­зиологическим значением рН среды, где оптимум действия ферментов лежит в преде­лах физиологических значений.

 

АЛТ и АСТ

 

Аланинаминотрансфераза и аспартатаминотрансфераза – ферменты (трансами­назы) плазмы крови. Роль трансаминаз сводится к передаче аминогрупп между амино­кислотами и кетокислотами. В крови животных активность обоих ферментов очень мала, однако при патологиях их количество в крови увеличивается. Каждому органу свойственна выработка своего набора (спектра) ферментов, появление их в жидкостях организма в больших количествах характерно для поврежденного органа.

АЛТ и АСТ распространены в тканях сердца, печени, скелетной мускулатуре, почках, меньше в поджелудочной железе, селезенке, легких.

Исследование активности АЛТ и АСТ в сыворотки крови имеет важное значение для дифференциальной диагностики болезней печени.

Определяют колориметрическим динитрофенилгидразиновым методом Рай­тмана и Френкель.

Принцип метода:

а) Содержание АЛТ прямо пропорционально содержанию пирувата в пробе на основе реакции с 2,4 динитрофенилгидразиновым в присутствии едкого натрия, и оп­ределяется по интенсивности окрашивания раствора.

б) Содержание АСТ прямо пропорционально содержанию оксалоацитата в пробе на основе реакции с 2,4 динитрофенилгидразиновым в присутствии едкого натрия, и определяется по интенсивности окрашивания раствора.

Материал для исследования – сыворотка крови.

Физиологические пределы представлены в таблице.

 

Количество АЛТ и АСТ в сыворотке крови животных

 

 

Примечание: при использовании ферментных тестов в диагностике болезней надо учитывать, что механизм гиперферментемий каждого фермента находится в зави­симости от локализации его в клетке и степени связи с клеточными структурами.

 

Холестерин

 

Протеолитический фермент – липопротеид – необходимый организму, он спо­собствует росту и делению клеток, показатель жирового обмена. Отражает не абсо­лютное содержание липидов в сыворотке, а относительные вклады насыщенных и не­насыщенных жирных кислот в процессе метаболизма.

Холестерин определяется энзиматическим или колориметрическим методом.

Принцип метода:

а) колориметрический: в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот холестерин дает изумрудное зеленое окрашивание. Интенсивность в этом случае прямо пропорциональна концентрации;

б) энзиматический: при гидролизе эфиров холестерина холестеролэстеразой об­разуется свободный холестерин. Образовавшийся и имеющийся в пробе холестерин окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в пробе.

Материал для исследования негемолизированная сыворотка крови.

Физиологические пределы приведены в таблице:

 

Количество холестерина в сыворотке крови животных

 

 

Увеличение количества холестерина в сыворотке крови называется гиперхоле­стеринемия, а уменьшение – гипохолестеринемия.

Креатинин

Креатинин представляет собой конечный продукт метаболизма креатина, синтезируемого в почках и печени из трех аминокислот (аргинина, глицина, метионина). Креатинин полностью выделяется из организма почками путём клубочковой фильтрации, не реабсорбируясь в почечных канальцах. Это свойство креатинина используется для исследования уровня клубочковой фильтрации по клиренсу креатинина в моче и сыворотке крови.

Количество креатинин в сыворотке крови животных

 

 

 

 

ЗНАЧЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ ПРИ ДИФФЕ­РЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ БОЛЕЗНЕЙ

 

Каротин (витамин А) сыворотке крови:

Пониженные показатели: легочные заболевания, дерматозы, диспепсия телят, по­чечная недостаточность, воспаления, голодание.

Повышенные показатели: наблюдается при поражении эндокринной системы.

 

Резервная щелочность плазмы крови:

Пониженные показатели: метаболический и респираторный ацидоз, ацидоз при го­лодании, поносы, токсикозы беременности, кетоз, тяжелая форма токсической дис­пепсии, алиментарная остеодистрофия, рахит, пневмония, бронхопневмония, тяжелая форма мио­гемоглобинурии лошадей, острая форма тейляриоза с тяжелым течением, типичная гене­рализованная форма ящура, болезнь Ауески, бруцеллез.

Повышенные показатели: при лихорадке, токсических отравлениях (особенно са­лицилатами), передозировке карбоната кальция, при сильной рвоте у свиней.

 

Сахар (глюкоза) крови:

Пониженные показатель: голодание, ацидоз, кетоз, диспепсии, тейлериоз, появ­ле­ние выраженных форм А-авитаминоза, недостаток микроэлементов, лейкоз, гипо­функция надпочечников и/или щитовидной железы, острое поражение печени, заболе­вание парен­химы печени, остеодистрофия, гипокинезия.

Повышенные показатели: гиперфункция щитовидной железы, гиперфункция над­почечников после применения АКТГ, почечная недостаточность, нефрит, цирроз. Первая фаза патологического процесса с клиническим проявлением заболевания же­лудочно-ки­шечного тракта у лошадей с симптомокомплексом колик, атония предже­лудков, парали­тическая миогемоглобинурия у лошадей, болезнь Ауески, острое воспа­ление, ингаляци­онный наркоз (эфир, хлороформ).

 

Общий кальций в сыворотке крови:

Пониженные показатели: рахит, остеомаляция, недостаток витамина D при из­бытке фосфора и цинка, голодание, уремия, нефроз и нефрит, поносы, послеродовой па­рез, легочных заболеваниях, терминальная форма туберкулеза, гипофункция щито­видной железы (тетания), лейкоз, диспепсия телят, явно выраженное заболевание кур желточным перитонитом, паратуберкулез, болезнь Ауески.

Повышенные показатели: активное формирование костной мозоли, завершение ее формирования, заживление переломов, гиперфункция щитовидной железы, гипер­функция передней доли гипофиза, острая атрофия костей, метаболический ацидоз, из­бытке йода и витамина D.

 

Неорганический фосфор в сыворотке крови:

Пониженные показатели: гиповитаминоз D, рахит, хроническая форма остео­дис­трофии, прогрессирующий остеопороз, избыток кальция, дефицит витамина D, го­лодание, анемия, диспепсия телят, родильный парез, явно выраженное заболевание кур желточным перитонитом, генерализованная форма ящура, гипофункция щитовидной железы, гипер­функция околощитовидной железы.

Повышенные показатели: почечная недостаточность, гипервитаминоз D, нефрит, острая дистрофия печени, поносы, метаболический ацидоз, заживление переломов, ак­тив­ное формирование костной мозоли, период синдрома колик (возбуждение), хемо­стаз под­вздошной кишки, тяжелая форма миогемоглобинурии, атонии преджелудков, лейкоз, ги­перфункция щитовидной железы, гипофункция паращитовидных желез, ост­рая форма остеодистрофии.

 

Остаточный азот в сыворотке крови:

Пониженные показатели: печеночная недостаточность, острая дистрофия пе­чени, цирроз, беременность.

Повышенные показатели: инфекционные заболевания с прогрессирующим рас­па­дом тканей, пневмония, перитониты, острая дистрофия печени, тяжелая форма дис­пепсии у телят, почечная недостаточность, нефриты, лейкоз, острая форма тейлериоза, А-авита­миноз, в период до проявления клинических признаков заболевания у кур жел­точным перитонитом, ранения, переломы костей, ожоги.

 

АЛТ АСТ в сыворотке крови:

Повышенные показатели: острые заболевания печени, мышечная дистрофия, дис­пепсия, травмы, при чрезмерных физических нагрузках, сепсис, перитонит, токсе­мия, панкреатит.

 

Общий белок сыворотки крови:

Пониженные показатели: гидремия, голодание, хроническое расстройство же­лу­дочно-кишечного тракта, нефротический отек, беременность, амилоидоз, затяжной сеп­сис, индуративная и терминальная формы туберкулеза, острая форма тейляриоза с тяже­лым течением, сразу после травмы, клинически больные при паратуберкулезе.

Повышенные показатели: дегидратация, рвота, острые воспаления, флегмоны, сеп­сис, заболевания печени (гепатиты, дистрофия), тяжелые инфекции.

 

Альбумины в сыворотке крови:

Пониженные показатели: диффузный цирроз печени, голодание, кахексии, ин­фек­ционные заболевания, воспаление, острые пневмонии и бронхопневмонии, ослож­нение пневмонии гангреной легких, у животных с клиническими признаками туберку­леза, в предклинический и особенно клинический период паратуберкулеза, болезнь Ауески, лей­коз, кетоз, диспепсия телят, А-авитаминоз, паралитическая миогемоглоби­нурия, ранняя стадия и период явно выраженной болезни кур желточным перитони­том, тейляриоз.

Повышенные показатели: дегидратация.

 

Глобулины в сыворотке крови:

Повышенные показатели: лейкоз, кетоз, гепатит, диффузный цирроз печени, острые пневмонии и бронхопневмонии, осложнение пневмонии гангреной легких, тейляриоз в стадии явно выраженной болезни, желточный перитонит кур, болезнь Ау­ески у свиней.

 

Гамма-глобулины сыворотки крови:

Повышенные показатели: при диффузном циррозе и острой дистрофии печени, острая бронхопневмония в период развития болезни и сильное увеличение при хрони­че­ской форме, генерализованное течение туберкулеза, гипериммунизация паратубер­кулез­ной культурой, при клиническом проявлении паратуберкулеза, диспепсия телят, тяжелое течение тейляриоза, токсическое поражение печени, беременности, хрониче­ских инфек­ционных заболеваниях, иммунизации.

 

Кетоновые тела в крови:

Повышенные показатели: предклиническая форма кетоза, голодание, кахексия, ток­сическая диспепсия, гиперфункция щитовидной железы, предродовые токсикозы, травма­тический ретикулоперитонит, гипотония и атония преджелудков, тимпания рубца, лейкоз.

 

Мочевина:

Пониженные показатели: недостаток протеина, заболевания печени,

Повышенные показатели: белковый перекорм, дефицит углеводов, дегидрата­ция, заболевания почек, непроходимость кишечника, перитонит.

 

Холестерин:

Пониженные и повышенные показатели: различные заболевания печени, осо­бенно при гепатитах, явных нарушениях жирового обмена.

 

Креатинин:

Пониженные показатели: Нарушение функции почек (почечная недостаточность), гипертиреоз, применение фуросемида, витамина С., глюкозы, индометацина, маннита. Пациенты с диабетическим кетоацидозом могут иметь ложно завышенный уровень креатинина.

Повышенные показатели: Беременность

Калий:

Пониженные показатели: недостаток калия в кормах, гиперфункция коры над­по­чечников, алкалоз, диабетический ацидоз.

Повышенные показатели: некроз, гемолитическая анемия, почечная недостаточ­ность, дегидратация, пастбищная тетания.

 

Натрий:

Пониженные показатели: солевое голодание, нарушения обмена веществ, аци­доз, кетоз, остеодистрофия, избыток калия, почечная недостаточность.

Повышенные показатели: олигурия, анурии любого происхождения, под дейст­вием некоторых лекарств (кортикостероиды).

 

ИЗМЕНЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ

ПРИ НЕКОТОРЫХ ОСОБЕННОСТЯХ КОРМЛЕНИЯ

 

Известно, что вся внутренняя среда в организме обеспечивается сово­куп­ностью биохимических реакций прямого и обратного направления. В связи с чем при отсутст­вии определенных условий (достаточной концентра­ции, уровня рН, температуры, ка­тализатора и т.д.) становиться возможным не только ос­тановить реакцию организма, но и повернуть ее ход в другую сторону. Поэтому ниже представлена таблица, где не­которые биохимические показатели крови связаны с кормлением.

 

Биохимические показатели	Повышение содержания	Снижение содержания
Общий белок	Наблюдают при высоко­кон­центрат­ном типе кормле­ния, болезнях пе­чени и почек	Характеризует длительный недо­корм, белковое голо­дание, плохое усвоение протеина из кормов вслед­ствие хронических рас­стройств же­лудочно-ки­шечного канала, дефи­цита угле­водов, макро- и микро­элементов и вита­минов.
Мочевина	Наблюдается при белковом пере­корме, при дефиците лег­коперева­римых углеводов в рационе, при скармливании большого количества карба­мида.	Свидетельствует о недо­с­татке про­теина в рационе
Глюкоза (са­хар)	Не­дос­таточная продукция инсу­лина, скармливания большого ко­личества свеклы и патоки, при сильном возбуж­дении	Бывает при недостаточно­сти микро­элементов в орга­низме, легкоус­вояемых углеводов в ра­ционе, при кетозе, гипокинезии
Кетоновые тела	На­блюдается при высоко­кон­цен­тратном типе кормле­ния, при не­достатке сена и корне­пло­дов, а также при скармлива­нии недобро­качест­венных кормов с большим ко­личест­вом масляной кислоты	Может быть при наруше­нии руб­цового пищеваре­ния, вследствие дефицита в кормах микроэлемен­тов, гиподинамии, усиленного распада жиров, белков и углево­дов
Кальций	Встречается при избытке йода, ги­перфункции паращитовид­ных желез	Может быть при плохом усвое­нии протеина и угле­водов и из­бытке фосфора и цинка
Фосфор	При гипофункции паращито­видных желез, высококонцен­тратном типе кормления	Наблюдают при избытке кальция, малоконцентрат­ном типе кормле­ния
Натрий/калий	Повышение калия устанавли­вают при поедании большого количества свежей молодой травы	Снижение натрия в плазме крови отмечают при дли­тельном соле­вом голодании
Резервная ще­лочность	Метаболический алкалоз бы­вает при введении больших доз пищевой соды	Метаболический ацидоз отмеча­ют при однотипном высоко­кон­центрат­ном или силосно-жомо­вом кормле­нии
АЛТ и АСТ	При резком переходе с одного вида корма на другой, значи­тельное со­кращении объем­ных кормов	В результате длительного недос­та­точного кормления животных

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

 

Биохимическое исследование при нынешнем уровне развития про­мышленного животноводства является незаменимым составляющим эффектив­ного производства продукции. Передовые хозяйства с высоким уровнем рентабельности проводят перио­дические биохимические исследования поголовья с целью контроля и коррекции со­стояния стада.

Известно, что биохимические реакции веществ в организме тесно взаимо­свя­заны. Мало того, реакции обмена веществ предельно согласованы между собой. Изме­нение содержания или синтеза одного компонента не мо­жет не отразиться на концен­трации другого. Поэтому при правильном обме­не веществ, все показатели входят в определенные рамки.

Биохимические показатели являются своеобразным индикатором процес­сов происходящих в организме. Правильным будет также заметить, что биохимическое исследование не несет в себе ответы на все вопросы. Ведь существует бактериологи­ческое, гематологическое, токсикологическое и много других исследований. И каждое из них в какой то степени специфич­но.

В этом методическом пособии мы отразили только наиболее актуаль­ные и зна­чимые изменения внутренней среды.

Конечно, сложность биохимического исследования заключается еще в правиль­ной интерпретации данных. Ведь в итоге биохимического исследова­ния мы имеем по­казатели уровня обмена белков, углеводов, жиров, некото­рых продуктов метаболизма, микро-макроэлементов, а это еще не характери­стика.

На начальных этапах многие патологические процессы имеют сходную картину развития. Следовательно, правильный диагноз можно поставить только в связи с анамнезом и другими исследованиями. В то время, как основной положительный эф­фект таких исследований – это картина развития негативного процесса на самых ран­них стадиях.

Из всех биохимических исследований, по сравнению с другими, особен­но часто проводят исследование крови. И не случайно, так как кровь – это основная среда орга­низма, которая является зеркалом всего происходящего. Она выполняет многие функ­ции, но специалистам-практикам кровь интерес­на своей информативностью.

Некоторые исследователи выделяют клеточные реакции в отдельный самостоя­тельный вид. Но, если подойти к этому утверждению со стороны целостности всего организма и отметить слишком низкую жизнеспособность клетки по отношению к ор­гану или ткани или рассматривать организм как динамическую систему (то есть еще секунду назад организм был не тот по составу, как сейчас), то станет ясно, что крови отводится ведущая роль.

Таким образом, несмотря на видимый прогресс биохимического исследования крови, открыты еще далеко не все возможности. Вероятно, спустя некоторое время появятся ультраточные качественные и количественные реакции, которые постепенно займут место нынешних. Нашей же целью было обобщение уже имеющейся информа­ции для применения ее в практических целях.

 

 

 

 

ПРИЛОЖЕНИЕ

 

Таблица перевода традиционных биохимических показателей

плазмы крови животных в систему СИ

 

 

 

 

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

 

1.           Кормление высокопродуктивных животных – под ред. Я. Лабуды и П.В Дем­ченко – Москва Колос – 1976 г. – 336 стр.

2.           Кормление сельскохозяйственных животных – А.П. Дмитроченко и П.Д. Пше­ничный – Ленинград 1961 г. Москва – 528 стр.

3.           Биохимия животных. Фундаментальные и клинические аспекты – С.Ю. Зай­цев, Ю.В. Конопатов – Санкт-Петербург - Краснодар 2004 г. – 384 стр.

4.           Клиническая диагностика внутренних незаразных болезней сельскохозяйствен­ных животных – А.М. Смирнов, П.Я. Конопелько, В.С. По­стников и др. – Ленинград Колос 1998 г. – 447 стр.

5.           Клиническая биохимия сельскохозяйственных животных – Е.А. Васильева – Москва Россельхозиздат 1982 г. – 254 стр.

6.           Биохимия животных – А.И. Кононский – Москва Колос 1992 г. – 526 стр.

7.           Методические указания по применению унифицированных биохимических ме­тодов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях – Всесоюзная академия сельскохозяйственных наук имени В.И. Ленина – Мо­сква 1981 г. – 87 стр.

8.           Ветеринарная гепатология – Б.В. Уша – Москва Колос 1979 г. – 263 стр.

9.           Трактовка биохимических исследований – «Фауна-сервис» Ветеринарный гос­питаль, статья от 7 января 2005 г. – www.fauna-servis.ua/content/view/31/42

10.      Ветеринария – Большой энциклопедический словарь – www. rubricon.com/vet_1.asp

11.      Минский Ветеринарный WEB-Центр – webmvc.com

12.      Сибирский ветеринарный портал – www.vetport.ru